science-review.ru
Известно, что антиоксиданты флавоноидной природы содержатся практически во всех растительных объектах. Однако, исходя из доступности, активности и медико-биологической значимости календула (Calendulae officinalis L.) является важнейшим представителем среди антиоксидант содержащих растений.
Цветки календулы содержат разные биологически активные вещества, в том числе эфирные масла, каратиноиды и флавоноиды. Эти вещества обладают противовоспалительными и бактерицидными действиями [1-4]. Поэтому настойка Calendula officinalis L. применяются при лечении воспалительных заболеваний. Следует отметить, что экстракты Calendulae officinalis L. в сравнении с высокоочищенными препаратами растений обладают значительно невысокой биологической и др антиоксидантной активностью. Поэтому в настоящее время требуются лишь оптимальные подходы и технологические приёмы их выделения в чистом виде.
В связи с этим в данной работе для получения и выделения более активного антиоксиданта флавоноидной природы из Calendula officinalis L. нами были использованы в качестве сырья цветки растений. Для этого цветки календулы в количестве 500 г измельчали и загружали в специальную бутыль емкостью 2 литра. Затем заливали 0,5 л метанола и настаивали при комнатной температуре в течении 18 часов. Бутыль периодически встряхивали. Затем метаноловые экстракты порциями упаривали на роторном испарителе при температуре 40-50 0С до консистенции густой смолистой массы. Густую смолистую массу, полученную в результате упаривания метанолного экстракта, развели дистиллированной водой до получения однородного раствора. К раствору добавили хлороформ и н- бутанол. Органические вещества из раствора упаривали на роторном испарителе досуха. Этот процесс проводили в пять раз.
Таким образом, нами был получен сухой препарат календулы, содержащей антиоксиданты флавоноидной природы и другие биологически активные вещества. Чтобы получить более активные фракции флавоноиды антиоксидантной активности, далее проводили очистку полученного препарата.
Для этого в сухой препарат налили этилацетатный эфир и метанол в соотношении 7:1. После образования белой пленки на стенках колбы жидкость осторожно вылили и выделили очищенное белое вещество, то есть готовый препарат к применению. Затем определяли антиоксидантную активность полученного препарата. Антиоксидантную активность препарата определяли с помощью катехина. Для этого приготовили 0,1 М ацетатный буфер с рН 4,2, содержащий 4 мМ катехина, 10% этанола и 10 мг/мл FeCI3. Затем брали в количестве 2 мл этого раствора и добавили 0,2 мл исследуемого растительного препарата и инкубировали при температуре 40 0С в термостате в течении 25-30 часов. Каждый час определяли антиоксидантную активность, измеряя оптическую плотность приготовленного препарата на фотоколориметре при длине вольны 440 нм. При этом в качестве контрольного образца использовали реакционную среду c катехином без исследуемого образца.
Полученные данные по антиоксидантной активности приведены на рисунке 1. Из рис. 1 видно, что исследуемый препарат через 6 часов начал проявлять антиоксидантную активность. При времени инкубации составляющей 8 часов препарат проявил максимальную антиоксидантную активность. Следует отметить, что с увеличением времени инкубации и температуры реакционной среды с экстрактом проявила максимальную антиоксидантную активность.
Рис.1. Антиоксидантная активность препарата, выделенного из растений Calendula officinalis L
В связи с этим изучали влияние температуры на антиоксидантную активность препарата полученного из календулы (5-6). Полученные результаты представлены на рис. 2.
Из рис 2 видно, что при температуре 200С препарат обладает более низкой антиоксидантной активностью. При этом препарат проявляет антиоксидантную активность через 16 часов. При 400С препарат проявляет антиоксидантную активность через 8 часа инкубации. Затем активность несколько снижается.
Кроме того в данной работе изучали влияния рН среды на антиоксидантную активность препарата, где представлены данные на рис.3. При этом было установлено, что при низком рН (рН=3,5) препарат проявлял невысокую антиоксидантную активность. Выделенный препарат более высокую активность достигало при рН = 4,5. Дальнейшее увеличение показания рН среды не благоприятно действовало на антиоксидантную активность препарата.
Рис.2. Влияние рН среды на антиоксидантную активность препарата, выделенного из растений Calendula officinalis L
Таким образом, на основе растений Calendulae officinalis был получен очищенный препарат флавоноидной природы обдающий антиоксидантной активностью. Кроме того были изучены некоторые кинетические параметры полученного препарата.
Рис.3. Влияние температуры на антиоксидантную активность препарата, выделенного из растения Calendula officinalis L
Выводы
1. На основе растения Calendula officinalis L. был получен очищенный препарат флавоноидной природы, обладающий антиоксидантной активностью.
2. Были изучены некоторые кинетические параметры полученного препарата и было установлено, что при 400С температуры полученный препарат обладает максимальной антиоксидантной активностью. В работе показана, оптимальная рН среда, в которой препарат проявил максимальную антиоксидантную активность.